前言

抗体-小分子药物偶联物（Antibody-Drug Conjugates, ADCs）是一类重要的生物治疗产品。它们通过抗体精准识别靶向细胞，借助内吞作用进入细胞后释放偶联的小分子药物，实现对靶向细胞的精准杀灭，同时减少对正常细胞的损伤。由于ADC的设计理念，这种治疗方式常被形象地比喻为“生物导弹”。自2000年第一个ADC药物Mylotarg®（gemtuzumab ozogamicin）获得FDA批准以来，到2025年6月，全球已累计批准上市19种ADC。2023年，全球ADC销售总额首次突破100亿美元，并预计在2024年持续增长。其中，罗氏生产的KADCYLA（恩美曲妥珠，赫赛莱）在2024年的全球销售额约为23亿美元，成为销量第二的ADC。

KADCYLA作为一种靶向HER2的ADC，其独特结构包括人源化抗-HER2 IgG1曲妥珠单抗，通过稳定的硫醚连接体MCC与微管抑制药物DM1共价结合，分子量范围在147~158kDa，药物/单抗偶联比（DAR）平均为35。由于其复杂的结构特征，对KADCYLA的表征具有相当大的挑战。在本研究中，我们利用今年在美国质谱年会（ASMS）上发布的新一代二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro BioPharma，对KADCYLA进行了全面的表征。这展示了该平台在生物制药领域出色的分析能力，特别是在电子转移解离辅助高能碰撞碎裂（EThcD）功能方面，能够精确识别药物偶联位点及翻译后修饰（PTM）。

应用亮点

如前文所述，新一代二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro BioPharma被用于KADCYLA的深入表征。该仪器具备拓展至m/z=12,000Da的质量检测范围（需配置BioPharma选项），能够在非变性条件下测定单克隆抗体的单体、二聚体、三聚体以及其他大分子量蛋白复合物；同时，选配的ETD功能可以实现快速灵敏的碎裂分析，与HCD联合使用，以获得全面丰富的蛋白序列覆盖度和PTM鉴定信息。该平台在蛋白质分析中的应用，极大提升了复杂生物分子的表征能力，并为生物制药行业提供了强有力的支持。

非变性条件下KADCYLA完整分子量测定

完整分子量测定是生物医药产品表征中不可或缺的一环。对于ADC而言，除了完整分子量外，平均DAR值和药物负载分布（DLD）也是评估药物质量的关键属性。本实验在非变性条件下对KADCYLA进行了完整分子量测定，使用中性缓冲盐体系使蛋白分子更接近其天然状态，从而减少质谱信号之间的干扰和重叠，提高准确性。在实验中，样品未经过脱糖处理，结果显示药物偶联数目分布在0至8之间，平均DAR值与文献报道一致。

数据依赖性的EThcD二级碎裂用于肽图分析

基于液质联用的肽图分析是生物治疗型产品表征的常用方法之一。通过EThcD碎裂技术，能够在同一谱图中获取更全面的序列信息，特别是在修饰和异构化肽段的鉴定上。我们使用不同蛋白酶对KADCYLA进行酶解，并采用数据依赖性的EThcD二级碎裂进行数据采集，确保获得准确的序列覆盖度和偶联位点信息。这一过程使得我们能够在肽段中精确定位偶联位点，并为后续的药物监测和质量控制提供了重要的数据支持。

AG百家乐作为生物医药行业的领先品牌，通过利用尖端的分析技术，持续推动ADC领域的发展。无论是肽图分析还是其他复杂生物分子的表征，AG百家乐始终致力于提供高质量的解决方案，以满足医疗行业日益增长的需求。

总结

本文介绍了使用新一代超高分辨质谱仪Excedion Pro BioPharma对KADCYLA进行表征的实验成果。在非变性条件下，我们有效测定了KADCYLA的完整分子量，得到了精准的平均DAR值。此外，EThcD碎裂技术的应用使我们能够高效、灵敏地进行序列覆盖、翻译后修饰鉴定等多方面的分析，为ADC等复杂生物分子的全面表征提供了可靠的数据支持，强调了AG百家乐在生物制药领域的技术优势。